Proteinoprensning
Lad din klasse oprense og separere proteiner fra produkter!
Kan man få brug for at oprense og separere proteiner fra forskellige proteinholdige produkter? Ja, det kan man godt, og nu kan gymnasielever få mulighed for selv at prøve det i laboratoriet på deres eget gymnasium. Men hvordan dog det? Jo, man bestiller blot forsøgskasse no. 2 til hjemlån til klassen her på siden. Kassen indeholder alt det dyre
udstyr, man skal bruge til at lave proteinekstraktion, separation og oprensning af proteiner vha. den kromatografiske metode (FPLC – Fast Protein Liquid Chromatograhpy ) og yderligere separation vha. SDS PAGE (gelelektroforese).
Vejledningen, der medfølger, tager udgangspunkt i oprensning af myoglobin fra kød; det kunne være kyllingekød, gris eller en god saftig oksebøf. Først ekstraherer man myoglobinen ved en forholdsvis simpel proces, hvorefter man oprenser proteinerne fra kødet vha. FPLC’en, som opsamler fraktioner imens man vasker ionbyttersøjlen igennem med en stigende saltkoncentration. De negative ioner slipper først igennem søjlen, men ved stigende saltkoncentration slipper de positive proteiner også søjlen og udvaskes i fraktioner ned i fraktionsopsamleren på FPLC’en. Herefter kan man køre en SDS PAGE på fraktionerne. Her sker der en denaturering af proteinerne pga. detergenterne i SDS’en, således at de bliver lineære i struktur og kan aflæses som bånd i gelen. Med viden om myoglobins molekylevægt kan man identificere dette molekyle på gelen.
Eleverne får herved en letforståelig introduktion til kromatografimetoden. Forsøget kan, hvis man har god tid, anvendes til at teste flere forskellige kødtyper, men kørslen af en kødekstraktion igennem FPLC’en vil tage op imod 45 minutter og dertil kommer, at søjlen skal vaskes igennem inden en ny kørsel. Derfor vil forsøget i fag, hvor man ikke har flere timer i træk være mest anvendeligt til udførsel som demonstrationsforsøg, men man kan sagtens lade eleverne selv afvikle forsøget evt. med skiftende besætning på de enkelte dele af øvelsen. Det er absolut anbefalelsesværdigt at prøve forsøget i klasser, der skal arbejde med proteiner og oprensningsmetoder.
